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【资讯】垂花蕙兰丛生芽途径的组织培养技术0鲜卑花属

发布时间:2020-11-04 06:29:25 阅读: 来源:风口厂家

垂花蕙兰系以花葶下垂的多花兰、硬叶吊兰、紫纹兰、湿地兰、沟唇兰、地旺兰等为亲本与大花蕙兰杂交产生的后代,花多色艳,开花期长达30-60天,该花虽然繁殖系数高,但是再生植株容易出现变异,本实验从无菌材料获得不同浓度6-BA 对丛生芽诱导和增殖的影响,主要是为了建立垂花蕙兰丛生芽增殖途径的离体快繁技术体系,接下来小编就来详细说说。

1 材料与方法

1.1 材料

试验所用材料来自三明市农科院花卉研究所垂花蕙兰。

1.2 方法

1.2.1 无菌材料获得

材料的预处理:在取侧芽之前要进行消毒,可以采取以下措施:

采用温室栽培母株、定期给母株喷洒1000 倍50%甲基托布津药液、在春季晴天上午取材、尽量取高于栽培基质的侧芽。

侧芽的表面消毒:用手术刀采取饱满叶片尚未展开的侧芽,切去根后用自来水冲洗20分钟,转入净化工作台,可采用以下四种方法进行表面消毒:

A:用0.1%的升汞溶液处理10min,用无菌水冲洗3-4 次,无菌滤纸吸干,再剥去外面1-2片叶,接种到诱导培养基上培养。

B:先用72%乙醇浸泡30s,然后用0.1%的升汞溶液处理10min,用无菌水冲洗3-4 次,无菌滤纸吸干,再剥去外面1-2 片叶,接种到诱导培养基上培养。

C:先用72%乙醇浸泡30s,然后用0.1%的升汞溶液处理8min,用无菌水冲洗3-4 次,剥去外面1-2 片叶,再用15%的次氯酸钠溶液处理4min,无菌水冲洗3-4 次,无菌滤纸吸干,接种到诱导培养基上培养。

D:先用72%乙醇浸泡30s,然后用15%的次氯酸钠溶液处理10min,用无菌水冲洗3-4次,无菌滤纸吸干,再剥去外面1-2 片叶,接种到诱导培养基上培养。

不同取材季节对侧芽消毒效果的影响:分别在春季3月、夏季6月和秋季9月采取侧芽,进行表面消毒处理后接种到诱导培养基上培养。观察不同取材季节对侧芽消毒的影响,以上诱导培养基均为1/2MS+6-BA4.0 mg· L-1+NAA0.1 mg · L-1+AC0.5 g · L-1。

1.2.2 丛芽的诱导培养

选取健壮、无病虫害、叶片尚未完全展开的垂花蕙兰侧芽,采用消毒方法C进行表面消毒处理,将消毒好的腋芽接种到6-BA 浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0 mg · L-1诱导培养基1/2MS+NAA0.1mg · L-

1+AC0.5 g· L-1 上进行丛生芽的诱导,观察不同浓度6-BA 对丛生芽诱导影响。

1.2.3 丛芽的增殖培养

将诱导获得的无菌芽接种到培养基1/2MS+6-BA4.0 mg · L-1+NAA0.1 mg · L-1+AC0.5 g·L-1 上继代培养3 次后获得足够的材料,然后接种到到6-BA 浓度分别为2.0、4.0、6.0、8.0 mg · L-1 增殖培养基1/2MS+NAA0.1mg· L-1+AC0.5 g · L-1 上进行增殖培养,观察不同浓度6-BA 对丛生芽增殖的影响。

1.2.4 生根与壮苗培养

以大量元素减半的1/2MS 为基本培养基,设置NAA、香蕉泥和AC3 因素和3 水平,NAA水平1、2、3 分别为0.5、1.0、2.0 mg · L-1,香蕉泥水平1、2、3 分别为0、30、50 g · L-1,AC 水平1、2、3 分别为0.5、1.0、2.0 g· L-1,每处理接种2 瓶,每瓶10 株无根苗,重复3 次。

1.2.5 炼苗移栽

将生根好的试管苗放在温室大棚炼苗4天,揭开瓶盖继续炼苗3天后用镊子小心取出试管苗洗去根部的培养基,把苗全部浸入800 倍的甲基硫菌灵药液10分钟后,捞起自然晾干后,移栽到苔藓、细小轻木颗粒、泥炭土、菜园土和泥炭:菜园土=1:1 基质中,放置在温室大棚中养护,保持湿度80%左右,温度16-28℃,同时定期喷晒100倍的MS培养基大量元素和800 倍70%甲基托布津药液,大约60天后统计苗的成活率。

1.2.6 培养条件

培养温度25±1℃,每天光照12h,光照强度2000lx,培养基均添加蔗糖30 g · L-1,pH5.6。

1.2.7 统计分析方法

污染率=(污染的外植体数/接种外植体数)×100%;褐化率=(褐化的外植体数/接种外植体数)×100%;死亡率=(死亡外植体数/接种外植体数)×100%;成活率=(未褐化成活的外植体数/接种外植体数)×100%;启动率=(启动外植体数/存活外植体数)×100%;生根率=(生根的苗数/接种的苗数)×100%;芽增殖系数=统计时芽数/接种时芽数;平均根数=生根总数/接种苗数;移栽成活率=(成活苗数/移栽苗数)×100%。用DPS 数据处理软件进行试验数据统计和分析,EXCEL 软件进行制表和绘图。

2 结果与分析

2.1 无菌材料获得

2.1.1 消毒方法对侧芽成活率的影响

由图1 可以看出,四种不同消毒方法中,D方法侧芽污染率最高,为69%,其次为A 方法和B方法,C方法污染率最低;而对于死亡率,D方法死亡率最低,仅为12%,其次是A 方法和C 方法,而B 方法侧芽死亡率最高;从成活率来看,C方法侧芽存活率最高56%,其次是A方法和B 方法,D 方法存活率最低,通过这些数据可知,升汞消毒效果比次氯酸钠好,三次消毒比一次、二次消毒效果好。

2.1.2 不同取材季节对侧芽消毒的影响

由表1 可知,三个不同取材季节中,夏季取材侧芽污染率最高为32%,其次是秋季为30%,春季侧芽污染率最低为22%;而对于褐化和死亡情况,秋季最高,其次是夏季,春季最低;从成活率来看,春季取材侧芽成活率最高达54%,其次是夏季,为38%,最低的是秋季,仅为36%。试验还发现,春季和夏季取材,侧芽启动时间短,生长速度快;而秋季取材,侧芽启动时间长,生长缓慢。因此,垂花蕙兰侧芽最佳取材季节是春季。

图1 四种消毒方法对侧芽成活率的影响

2.2 丛生芽的诱导

由表2 可见,当6-BA 浓度为0.5 mg · L-1 时,丛生芽诱导启动率最低,仅为47.1%。当6-BA浓度为4.0mg·L-1 时,丛生芽诱导启动率最高达100%。6-BA 浓度在0. 5-4.0 mg · L-1 范围之间,垂花蕙兰丛生芽启动率随6-BA 浓度增加而提高。6-BA 浓度在0. 5-2.0 mg · L-1 之间,芽分化较少。6-BA 浓度为4.0mg · L-1 时,芽分化较多。因此,4.0 mg · L-16-BA 适合丛生芽诱导。

2.3 丛芽的增殖培养

由表3 可看出,当6-BA 为6.0mg · L-1 时,丛生芽增殖倍数最大,为4.1。当6-BA 浓度为在2.0-6.0mg · L-1之间,丛生芽数随其浓度增大而提高。但当6-BA 为8.0 mg · L-1 时,丛生芽增殖系数降至3.2。丛生芽质量随着6-BA 浓度增大逐渐由健壮变为纤弱。适当提高6-BA 浓度有利于丛生芽的增殖,浓度过高,则抑制丛生芽的增殖。综合考虑,本试验6-BA浓度4.0mg·L-1 适合丛生芽增殖。

2.4 生根与壮苗培养

由生根率方差分析(表5)可知,NAA 对丛芽增殖苗生根率影响极显著,香蕉泥对生根率影响显著,而活性碳对生根率影响不显著。说明NAA 是影响生根率最主要因素。香蕉泥对试管的生根率也有促进作用。由生根数方差分析(表5)可知,NAA 和香蕉泥对丛生芽增殖苗生根条数有极显著影响,活性炭显著影响生根数。比较NAA 和香蕉泥的F 值可知,NAA 是影响丛生芽增殖苗生根的最主要因素,其次香蕉泥,再次是活性炭。对NAA、香蕉泥和活性碳各水平进行多重比较见表6。

由表6 可知,NAA三水平间,NAA水平3(2mg·L-1)的生根率和平均根数与水平1(0.5mg · L-1)、水平2(1 mg · L-1)差异极显著,水平2(1 mg · L-1)与水平1(0.5 mg · L-1)差异也极显著。可以说明,在0.5-

2.0mg · L-1 浓度范围,生根率和平均根数随NAA 浓度升高而升高。NAA 浓度为2.0mg · L-1 时,生根率最高,平均根数也最多。

由表6 可以看出,香蕉泥三水平间,水平3(50 g · L-1)生根率与水平1(0 g · L-1)差异显著,水平3(50 g · L-1)与水平2(30 g · L-1)、水平1(0 g · L-1)与水平2(30 g · L-1)差异不显著。三水平之间

的平均根数差异极显著。说明,添加一定量的香蕉泥能促进根的生长,本试验香蕉泥浓度为50 g · L-1 时,生根效果最好。

由表6 可知,AC 三水平的生根率差异不显著。水平2(1 g · L-1)平均根数与水平1(0.5g · L-1)、水平3(2 g · L-1)差异显著。平均生根数随着AC 浓度升高先升高后降低,本试验AC 浓度为1 g · L-1 时,生根培

养效果最好。

综上所述,适宜垂花蕙兰丛生芽苗生根培养基配方为1/2MS+NAA2.0 mg · L-1+香蕉泥50 g · L-1+AC1 g · L-1。

2.5 炼苗和移栽

由表7 可看出,五种基质中,以苔藓为最好,成活率可达100%,苗生长健壮,叶片浓绿富有光泽;其次是细小轻木颗粒,成活率为86%,苗生长较好,叶片黄绿根系发达;泥炭土移栽效果一般,成活率也只有68%;移栽效果最差的基质是菜园土,成活率为54%,苗呈萎蔫状,不生长。可见,本试验垂花蕙兰瓶苗移栽最佳基质是苔藓。

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